Medical Sciences Journal of Islamic Azad University

fa مقایسه دو روش استخراج وزیکول‌های خارج سلولی از Clostridium perfringens Comparison of two extraction methods of extracellular vesicles from Clostridium perfringens ميكروبيولوژي Microbiology تجربي Experimental سابقه و هدف: وزیکول‌های خارج سلولی (EVs)، وزیکول‌هایی با اندازه نانو تا میکرون هستند که می‌توانند محموله‌های زیستی را حمل کنند. همه انواع سلول‌ها می‌توانند EVها را ترشح کنند که مشارکت آنها در مکانیسم‌های حیاتی مختلف سلول مشاهده شده است. روش‌های مختلفی جهت جداسازی EVها وجود دارد که دارای مزایا و معایبی هستند. هدف از مطالعه حاضر بررسی روش غیراولتراسانتریفیوژ و اولتراسانتریفیوژ در جداسازی EVها بود. روش بررسی: در این مطالعه تجربی ازATCC13124  perfringens Clostridium استفاده شد. بعد از کشت، استخراج EVها با دو روش غیراولتراسانتریفیوژ و اولتراسانتریفیوژ انجام شد. برای بررسی خصوصیات شیمیایی از تعیین غلظت پروتئینی EV با استفاده از دستگاه NanoDrop استفاده شد و الگوی پروتئینی EV با استفاده از تکنیک SDS-PAGE انجام شد. میکروسکوپ الکترونی عبوری(TEM) جهت بررسی خصوصیات فیزیکی EVها استفاده شد.  یافتهها: نتایج ما نشان داد که EVs جدا شده با روش اولتراسانتریفیوژ میزان پروتئین بالاتری در مقایسه با روش غیراولتراسانتریفیوژ ( به ترتیب17/3 و 46/1 میکروگرم بر میلی لیتر) داشتند. روش اولتراسانتریفیوژ نسبت به روش غیراولتراسانتریفیوژ،  EVs بیشتر و بزرگتری را جدا کرده بود. همچنین، الگوی های پروتئینی EVs با روش SDS-PAGE در هر دو روش مشابه بودند. نتیجهگیری: نتیجه مطالعه حاضر نشان داد که جداسازی EVهای حاصل از perfringens Clostridium با روش اولتراسانتریفیوژ می‌تواند روش بهینه‌تر و مقرون به صرفه‌تری نسبت به روش غیراولتراسانتریفیوژ باشد.   Background: Extracellular vesicles (EVs) are nano- to micron-sized vesicles with the ability to transport bioactive cargos. All types of cells have the ability to release EVs, which have been demonstrated to be involved in a number of essential cell functions. There are various methods for isolating EVs, each with advantages and disadvantages. The purpose of this study was to invistigate at the non-ultra centrifugation method and ultra-centrifugation method for isolating EVs. Materials and methods: Clostridium perfringens ATCC13124 was used in this experimental study. Following culture, EVs were extracted using two methods: Non-Ultra method and Ultra-method. To examine chemical characteristics, the EV protein concentration was measured using a NanoDrop device, and the EV protein pattern was identified using SDS-PAGE. Transmission electron microscopy (TEM) was utilized to examine the EVs' physical properties. Results: Our results showed that the EVs isolated by the Ultra-method had a higher protein content compared to the Non-Ultra method (3.17 and 1.46 mg/ml, respectively).The Ultra-method isolated more and larger EVs compared to the Non-Ultra method. Also, protein patterns of the EVs by SDS-PAGE method were similar in both methods. Conclusion: The present study showed that the Ultra-method can be a more efficient and cost-effective way for isolation EVs from Clostridium perfringens than the Non-Ultra method.   Clostridium perfringens , وزیکول‌های خارج سلولی, اولتراسانتریفیوژ, روش های استخراج EV. Clostridium perfringens, Extracellular vesicles, ultracentrifugation, EV extraction methods 121 128 http://tmuj.iautmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1739-1&slc_lang=fa&sid=1 Soheila Ostadmohammadi سهیلا استادمحمدی soheilamohammadi14@gmail.com 100319475328460012341 100319475328460012341 No PhD Student in Microbiology, Department of Biology, Science and Research Branch, Islamic Azad University, Tehran, Iran دانشجوی دکتری میکروبیولوژی، گروه زیست شناسی، واحد علوم و تحقیقات، دانشگاه آزاد اسلامی، تهران، ایران Seyed Ali Nojoumi سید علی نجومی ali.nojoumi@gmail.com 100319475328460012342 100319475328460012342 Yes Assistant Professor of Microbiology, Department of Mycobacteriology and Pulmonary Research, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran استادیار میکروبیولوژی، گروه مایکوباکتریولوژی و تحقیقات ریوی، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران Abolfazl Fateh ابوالفضل فاتح afateh2@gmail.com 100319475328460012343 100319475328460012343 No Associate Professor of Medical Virology, Department of Mycobacteriology and Pulmonary Research, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran دانشیار ویروس شناسی پزشکی، گروه مایکوباکتریولوژی و تحقیقات ریوی، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران Seyed Davar Siadat سید داور سیادت d.siadat@gmail.com 100319475328460012344 100319475328460012344 No Professor of Medical Bacteriology, Department of Mycobacteriology and Pulmonary Research, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran استاد باکتری شناسی پزشکی، گروه مایکوباکتریولوژی و تحقیقات ریوی، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران Fattah Sotoodehnejadnematalahi فتاح ستوده نژاد نعمت اللهی Fattah212@gmail.com 100319475328460012345 100319475328460012345 No Assistant Professor of Cellular and Molecular Immunology, Department of Biology, Science and Research Branch, Islamic Azad University, Tehran, Iran استادیار ایمنی سلولی و مولکولی، گروه زیست شناسی، واحد علوم و تحقیقات، دانشگاه آزاد اسلامی، تهران، ایران