fa همسانه سازی ژن ddh از Corynebacterium glutamicum در راستای افزایش تولید اسیدآمینه لیزین ژنتيك Genetic تجربي Experimental <p align="justify"><strong>سابقه و هدف:</strong> L لیزین یکی از اسیدهای آمینه ضروری است که به دلیل کاربرد بسیار در صنایع مختلف، در سال های اخیر تقاضا برای این اسید آمینه افزایش یافته و این منجر به گسترش تحقیقات برای تولید صنعتی این اسیدآمینه شده است. </p><p align="justify"><strong>روش بررسی:</strong> در این پژوهش با بهینه سازی ژنتیکی سعی در افزایش بازده تولید این اسیدآمینه شد. پس از بررسی آنزیم های تاثیرگذار در مسیر بیوسنتز لیزین، ژن ddh کدکننده آنزیم دی آمینوپیملات دهیدروژناز انتخاب شد. پس از استخراج DNA کروموزومی سویه Corynebacterium glutamicum ATCC 21799 و طراحی پرایمر، قطعه ژنی جدا شده و به منظور تسهیل همسانه-سازی و تعیین ترادف نوکلئوتیدی در وکتور TAcloning کلون گردید. هضم آنزیمی دو وکتور TAcloning و pET28a توسط آنزیم های برشی SalI و EcoRI انجام و پس از تیمار وکتور با آلکالین فسفاتاز، واکنش لیگاسیون صورت گرفت. سپس در سوش E.coliDH5α و در نهایت در میزبان بیانی E.coliBL21(DE3) ترانسفورم شد. </p><p align="justify"><strong>یافته ها:</strong> مشاهده باند bp1150 در نمونه های PCR و محصول پلاسمید تخلیص شده و هضم شده با دو آنزیم مذکور و همچنین نتیجه تعیین توالی نشان داد که ژن مورد نظر به درستی کلون گردیده است. بررسی میزان بیان پروتئین نوترکیب توسط ژل SDS-Page تاییدی دیگر بر صحت کلون سازی و فعالیت پروموتور می باشد.</p><p align="justify"> <strong>نتیجه گیری:</strong> در این تحقیق برای اولین بار میزان بیان آنزیم دی آمینوپیملات دهیدروژناز در این وکتور بیانی افزایش قابل قبولی را نشان داد. </p> <p align="left"><strong>Background:</strong> Due to wide range of application of L-Lysine, as an essential amino acid, in different industries, the demand for this amino acid has been increased and this has been led to the development of research on industrial production of L-Lysine. </p><p align="left"><strong>Materials and methods:</strong> In this study, we tried to increase the yield of production of L-Lysine by genetic optimization. After inspection of different effective enzymes in Lysine biosynthesis pathway, Diaminopimelate dehydrogenase (EC1.4.1.16) enzyme was selected. This enzyme would be coded by ddh gene. After chromosomal DNA extraction of C.glutamicum ATCC 21799 and designing of primers, the gene fragment was separated from genome by PCR with pfu DNA polymerase enzyme and was cloned in TAcloning vector for facilitation of cloning and determination of nucleotide sequence. Then, enzymatic digestion of TAcloning vector and pET28a vector were performed by EcoRI and SalI restriction enzymes which their products were ddh gene and linear vector. Ligation reaction was accomplished and for checking the accuracy of ligation, it was transformed into E.coliDH5α and finally in expression host, E.coli BL21(DE3). </p><p align="left"><strong>Results:</strong> The 1150bp band in PCR products and enzymatic digestion of extracted vectors with EcoRI and SalI, sequencing and SDS-PAGE confirmed the accuracy of cloning. Recombinant bacterial colonies were investigated and confirmed by two methods (PCR and enzymatic digestion). </p><p align="left"><strong>Conclusion:</strong> This study showed significant increased expression rate of DAP dehydrogenase enzyme in this expression vector for the first time. </p> سیدآمینه L- لیزین، کورینه باکتریوم گلوتامیکوم، بهینه سازی ژنتیکی، ژن ddh. L-Lysine, Corynebacterium glutamicum, Genetic optimization, ddh gene 82 88 http://tmuj.iautmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-338&slc_lang=fa&sid=1 Soheil Ghassemi سهیل قاسمی 10031947532846002990 10031947532846002990 No Islamic Azad University, Tehran, Iran دانشگاه آزاد اسلامی، واحد علوم و تحقیقات تهران Mehrdad Hashemi مهرداد هاشمی 10031947532846002991 10031947532846002991 No Tehran Medical Branch, Islamic Azad University, Tehran, Iran گروه ژنتیک مولکولی دانشگاه آزاد اسلامی، واحد پزشکی تهران Azim Akbarzadeh عظیم اکبرزاده azimakbarzadeh@pasteur.ac.ir 10031947532846002992 10031947532846002992 Yes Pasteur Institute, Tehran, Iran انستیتو پاستور ایران Seyed Mohammad Reza Mehrabi سیدمحمدرضا مهرابی 10031947532846002993 10031947532846002993 No Biotechnology Pilot Section, Pasteur Institute, Tehran, Iran انستیتو پاستور ایران Ali Farhangi علی فرهنگی 10031947532846002994 10031947532846002994 No Pasteur Institute, Tehran, Iran انستیتو پاستور ایران Soghra Cheraghi صغری چراغی 10031947532846002995 10031947532846002995 No Pasteur Institute, Tehran, Iran انستیتو پاستور ایران Zahra Saffari زهرا صفاری 10031947532846002996 10031947532846002996 No Pasteur Institute, Tehran, Iran انستیتو پاستور ایران، تهران Hilda Rastegari هیلدا رستگاری 10031947532846002997 10031947532846002997 No Islamic Azad University, Jahrom, Iran دانشگاه آزاد اسلامی، واحد جهرم