fa تعیین نواحی آنتی ژنیک 311 آمینواسید ناحیه کربوکسیل ادهزین Haps هموفیلوس آنفلوانزای بدون کپسول ميكروبيولوژي Microbiology تجربي Experimental <b>سابقه و هدف: </b>پروتئین Haps در تداخل اولیه هموفیلوس آنفلوانزای بدون کپسول با سلول‌های اپیتلیال دستگاه تنفس انسان نقش کلیدی را بازی می‌کند. در حالی که دیگر پروتئین‌های خارج سلولی هموفیلوس آنفلوانزای بدون کپسول از نظر ژنتیکی بسیار متغیر می باشند، Haps به میزان قابل توجهی در میان سویه‌های هموفیلوس آنفلوانزا حفظ شده است. در مطالعات اخیر اثبات شده است که فعالیت اتصالی Haps، در 311 آمینواسید ناحیه کربوکسیل (C-Haps) آن قرار دارد و همچنین نشان داده شده است که C-Haps قادر به القاء پاسخ ایمنی محافظت کننده در مقابل استقرار هموفیلوس آنفلوانزای بدون کپسول می‌باشد. <br><b>روش بررسی: </b>سازه pET24a-chaps حامل سکانس C-Haps هموفیلوس آنفلوانزای بدون کپسول 1766 PTCC ساخته شد. سکانس آمینواسیدی C-Haps این مطالعه با سکانس C-Haps 3 سویه دیگر هموفیلوس آنفلوانزای بدون کپسول (N187،TN106، P860295) مقایسه و نواحی آنتی ژنیک آن توسط نرم افزار بیوانفورماتیک تعیین شدند. سازه نوترکیب pET24a-chaps در میزبان اشرشیاکلی سویه BL21(D3E) بیان شد و توسط تکنیکهای SDS-PAGE و وسترن بلات مورد تائید قرار گرفت. پروتئین نوترکیب C-Haps توسط تکنیک کروماتوگرافی تمایلی تخلیص شد. <br><b>یافته‌ها:</b> مقایسه توالی آمینواسیدی rC-Haps مورد مطالعه با سکانس های آمینواسیدی C-Haps موجود در بانک ژن، بیش از 97% همسانی را نشان داد و نمودار آنتی ژنیسیته، 9 جایگاه آنتی ژنیک مشترک و قوی را تعیین کرد که دقیقا در مناطق حفظ شده بین سویه های مختلف هموفیلوس آنفلوانزای بدون کپسول مطالعه شده قرار داشت. <br> <b>نتیجه‌گیری: </b>به دلیل حضور جایگاه‌های آنتی ژنیک مشترک بین هموفیلوس آنفلوانزای بدون کپسول 1766 PTCC و دیگر سویه-های مطالعه شده، بنابراین C-Haps به دست آمده در این مطالعه از نظر تئوری می‌تواند به عنوان کاندیدای واکسن علیه سویه‌های مختلف هموفیلوس آنفلوانزای بدون کپسول سایر نواحی جغرافیائی نیز به کار رود. <b>Background:</b> Haps protein plays central role in initial interaction of nontypeable Haemophilus influenzae (NTHi) with human respiratory epithelial cells. While other surface-exposed proteins of NTHi are highly variable, The HapS domain is highly conserved among H. influenzae strains. Recent studies demonstrated that HapS adhesive activity resides within the C-terminal 311 amino acids of the protein and also they showed that the C-terminal 311 amino acids of HapS (C-Haps) are capable of eliciting a protective immune response against NTHi colonization. <br> <b>Materials and methods:</b> The pET24a-chaps plasmid harboring c-haps sequence from NTHi PTCC1766 was constructed. The amino acid sequences of C-Haps of this study was aligned with C-Haps of three NTHi strains (N187, TN106, P860295) and antigenicity plot of studied rC-Haps was done bioinformatic software. The pET24a-chaps expression was conducted in E.coli BL21 (D3E) and its expression was confirmed by SDS-PAGE and Western blotting methods. The rC-Haps was purified via immobilized metal affinity chromatography. <br><b>Results:</b> Amino acid sequence alignment of rCHaps sequence of current study and rC-Haps from the NTHi strains N187, TN106, P860295 showed more than %97 identity. Antigenicity plot identified 9 common highly antigenic domains that were located exactly in conserved regions among 4 different NTHi strains. <br><b>Conclusion:</b> Due to presence of highly conserved antigenic epitopes among C-Haps of NTHi PTCC1766 and other NTHi strains, rC-Haps of current study could be theoretically a vaccine candidate against NTHi strains of different geographical areas. هموفیلوس آنفلوانزای بدون کپسول, نواحی آنتی ژنیک, C-Haps Nontypeable Haemophilus influenzae, Antigenic epitopes, C-Haps 95 102 http://tmuj.iautmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-368&slc_lang=fa&sid=1 Akram Tabatabaee اکرم طباطبایی akram_tabatabaee@yahoo.com 10031947532846004524 10031947532846004524 Yes PhD of Microbiology, Department of Biology, Islamic Azad University, Science and Research Branch, Tehran, Iran دکتری میکروبیولوژی، گروه زیست شناسی، دانشگاه آزاد اسلامی واحد علوم و تحقیقات تهران Seyed Davar Siadat سید داور سیادت 10031947532846004525 10031947532846004525 No PhD of Medical Microbiology,Department of Microbiology, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran دکتری میکروبیولوژی پزشکی، گروه میکروبیولوژی، انستیتو پاستور ایران Seyed Fazllolah Mousavi سید فضل الله موسوی 10031947532846004526 10031947532846004526 No PhD of Microbiology & Immunology, Department of Microbiology, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran دکتری میکروبیولوژی و ایمونولوژی، گروه میکروبیولوژی، انستیتو پاستور ایران Mohammad Reza Aghasadeghi محمدرضا آقاصادقی 10031947532846004527 10031947532846004527 No PhD of Biologic Process,Department of Hepatitis and AIDS, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran دکتری فراورده های بیولوژیک، گروه هپاتیت و ایدز، انستیتو پاستور ایران