fa استفاده از ویروس های نوترکیب مشتق از HIV-1 برای ترانسداکشن سلول های HT1080 با هدف ژن درمانی بیماران بتا - تالاسمی اپيدميولوژي Epidemiology <span style="font-weight: bold">سابقه و هدف</span>: یکی از روش های درمانی موثر برای بیماری بتاتالاسمی، ژن درمانی توسط ویرال وکتورها می باشد. هدف از این مطالعه ساخت لنتی ویروس های نوترکیب حاوی ژن بتاگلوبین و mini LCR جهت انتقال سازه ژنی مورد نظر به سلول های هدف به منظور ژن درمانی بتاتالاسمی ماژور می باشد.<br><span style="font-weight: bold"> روش بررسی</span>: در این مطالعه بنیادی - کاربردی، هر یک از قطعات ژن بتاگلوبین و mini LCR در یک لنتی وکتور به نام pLenti-Destکلون شدند. طی ترانسفکشن هم زمان وکتور نهایی به همراه سه وکتور کمکی با لیپوفکتامین 2000 به درون رده سلولی 293T، لنتی ویروسهای نوترکیب حاوی سازه ژنی مورد نظر تولید و با RT PCR تایید شدند.<br><span style="font-weight: bold">یافته ها</span>: تیتر این لنتی ویروس های نوترکیب در رده سلولی HT1080 تعیین شد. ترانسداکشن سلول های هدف در حضور پلی برن 2 برابر شد. سلول های HT1080 ترانسدیوس شده پس از دو هفته انتخاب آنتی بیوتیکی باقی ماندند. DNA این کلونی های باقی مانده استخراج و با روش PCR اینتگره شدن سازه ژنی ساخته شده تایید شد. MOI اپتیمم این ویروس ها برای سلول HT1080 بدست آمد.<br><span style="font-weight: bold"> نتیجه گیری</span>: می توان از لنتی ویرال وکتورها سبب انتقال موثر، کارآمد و پایدار ژن به سلول های پستانداران مانند سلول های بنیادی با هدف ژن درمانی بسیاری از بیماری های ژنتیکی از جمله بتاتالاسمی و سرطان استفاده کرد. <span style="font-weight: bold">Background</span>: One of the most effective methods in the treatment of β-thalassemia is gene therapy by viral vectors. The aim of this study was to design a recombinant lentivirus containing mini LCR and β-globin gene for transferring normal β-globin gene into hematopoetic stem cells.<br><span style="font-weight: bold">Materials and methods</span>: In this basic-applied study, each segment was cloned into a lenti transfer vector and confirmed by restriction digestion and sequencing. Transfer vector and three packaging plasmids were cotransfected into 293T packaging cells using lipofectamine 2000. Harvested viruses were confirmed by RT PCR on extracted RNA of these recombinant lentiviruses. <br><span style="font-weight: bold">Results</span>: The titer of lentiviral stock was determined in a HT1080 cell line. Transduction of target cells was increased by polybrene until 2 fold. Transduced HT1080 colonies remained after 2-week antibiotic selection. The remained transduced HT1080 colonies were expanded and DNA was extracted. PCR evaluated random integration of construct into the genome in this gene transfer technique. Optimum MOI for HT1080 cell line was determined. <br><span style="font-weight: bold">Conclusion</span>: Lenti viruses can be used for effective and permanent gene transfering in mammalian cells such as hematopoetic stem cells in order to accomplish gene therapy of genetic diseases like beta thalassemia and cancers. ژن درمانی، بتاتالاسمی، ژن بتاگلوبین، لنتی ویروس نوترکیب Gene therapy, β-thalassemia, β-globin gene, Recombinant lentivirus 160 167 http://tmuj.iautmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-209&slc_lang=fa&sid=1 Maryam Bikhof Torbati مریم بی خوف تربتی 10031947532846001278 10031947532846001278 No Hossein Khanahmad حسین خان احمد 10031947532846001279 10031947532846001279 No Fatemeh Jamshidi فاطمه جمشیدی 10031947532846001280 10031947532846001280 No Morteza Karimipor مرتضی کریمی پور 10031947532846001281 10031947532846001281 No Majid Sadeghizadeh مجید صادقی زاده 10031947532846001282 10031947532846001282 No Mohamad Ali Shokrgozar محمدعلی شکرگزار 10031947532846001283 10031947532846001283 No Amir Amanzadeh امیر امان زاده 10031947532846001284 10031947532846001284 No Sirus Zeinali سیروس زینلی sirouszeinali@yahoo.com 10031947532846001285 10031947532846001285 Yes