fa بهینه‌سازی بررسی میزان همانندسازی ویروس کمبود ایمنی انسانی تیپ یک با استفاده از ویریون‌های با قابلیت یک سیکل تکثیر ژنتيك Genetic تحليلي/مقطعي/توصيفي Survey/Cross Sectional/Descriptive <span style="font-weight: bold">سابقه و هدف</span>: ویریون مربوط به ویروس کمبود ایمنی انسانی (HIV) با قابلیت همانندسازی در پژوهش‌های مربوط به HIV مانند پژوهش‌هایی با هدف یافتن ترکیبات ضد ویروسHIV جدید مورد نیاز است. در این مطالعه، همانندسازی HIV-1 با استفاده از ویریون‌های با قابلیت یک سیکل تکثیر (SCR) انجام شد. <br><span style="font-weight: bold">روش بررسی</span>: ویریون SCR به وسیله ترانسفکت کردن سلول‌های HEK293T با پلاسمیدهای pmzNL4-3 ، pSPAX2 و pMD2G تولید شد. سلول‌های هدف HEK با مقادیر متفاوت از ویروس SCR آلوده شده و میزان p24 مایع رویی سلول با p24 ELISA اندازه گیری شد. در ادامه، اثر ضد ویروسی HIV-1 دو داروی شناخته شده ایدز به نامهای نویراپین و ایندیناویر به عنوان کنترل مورد بررسی قرار گرفت. <br><span style="font-weight: bold">یافته‌ها</span>: همانندسازی مناسب ویریون‌های SCR برروی سلول‌های هدف HEK با تیتر شروع کننده ng P24 600 ویروس بود. افزایش p24، 24 ساعت پس از آلودگی قابل سنجش بود و پس از گذشت 48 ساعت به حد اکثر مقدار رسید. غلظتی از داروهای نویراپین و ایندیناویر که 50 و 95 درصد توان بازداری HIV-1 ( IC50و IC95) را داشتند، به ترتیب حدود 50 و 25 نانو مولار بود.<br><span style="font-weight: bold">نتیجه‌گیری</span>: میزان اثر ضد ویروسی دو داروی نویراپین و ایندیناویر نشان دهنده دقت مناسب این روش برای سنجش اثر ضد HIV-1 ترکیبات مختلف است. توان همانندسازی یک دوره‌ای SCR HIV باعث افزایش امنیت زیستی روش ابداعی در این مطالعه می‌باشد. <span style="font-weight: bold">Background</span>: HIV virions with replication capacity are needed for HIV researches, like investigating for new anti HIV agents. Here HIV-1 replication assay was optimized with HIV-1 single cycle replicable (SCR) virions to improve biological safety condition. <br><span style="font-weight: bold">Materials and methods:</span> pSPAX2, pmzNL4-3 and pMD2G plasmids were co-transfected to the HEK293T by using polyfect reagent to produce the SCR HIV-1 virions. Virions were quantified using capture ELISA P24. Different MOI of SCR virions were used for infecting of Target cells (HEK) and the load of the supernatant P24 was monitored days after infection. Single cycle replication assay (SCRA) was developed using kinetic studies data. <br><span style="font-weight: bold">Results</span>: The P24 load of the infected cells supernatant has linear relation to the beginning infectious MOI. 24 hours post infection with HIV-1 SCR virions the viral particle production was detectable. The highest load of P24 in infected cells supernatant was detected 48 hours after infection. Using this developed method, the 50 and 95 percent inhibitory concentration of (IC95 and IC50) Indinavir and Nevirapine were calculated as 25nM and 50nM. <br><span style="font-weight: bold">Conclusion</span>: In this study, using SCR HIV-1 virions the SCRA was developed. SCR HIV-1 virions are replicable only for one cycle and this improves the safety of developed assays. The accuracy of assay was examined by quantifying the anti HIV-1 potential of two commercial anti-AIDS drugs and the calculated activity for test agents was equal to previously known amounts. ویروس کمبود ایمنی انسانی، ویریون‌های با قابلیت یک سیکل تکثیر، میزان همانندسازی، ایمنی زیستی HIV, SCR, Replication assay, Biological safety, Anti-HIV agent 244 250 http://tmuj.iautmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-155-21&slc_lang=fa&sid=1 Rezvan Zabihollahi رضوان ذبیح اللهی Rezvan_z_m@yahoo.com 10031947532846003252 10031947532846003252 Yes Medical student, Department of Hepatitis and AIDS, Pasteur institute of Iran, Tehran, Iran دانشجوی پزشکی، گروه هپاتیت و ایدز، انستیتو پاستور تهران Maryam Nourmohammadi مریم نور محمدی 10031947532846003253 10031947532846003253 No BSc, Department of Medical Genetics, Faculty of Medicine, Isfahan University of Medical Sciences, Isfahan, Iran کارشناس، گروه ژنتیک پزشکی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی اصفهان Rouhollah Vahabpour روح الله وهاب پور 10031947532846003254 10031947532846003254 No MSc, Department of Hepatitis and AIDS, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran کارشناس ارشد، گروه هپاتیت و ایدز، انستیتو پاستور تهران Seyed Mehdi Sadat سید مهدی سادات 10031947532846003255 10031947532846003255 No MSc, Department of Hepatitis and AIDS, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran کارشناس ارشد، گروه هپاتیت و ایدز، انستیتو پاستور تهران Azar Farhang Esfahani آذر فرهنگ اصفهانی 10031947532846003256 10031947532846003256 No MSc Student, Young Researchers Club, Islamic Azad University, Falavarjan branch, Falavarjan, Iran دانشجوی کارشناس ارشد و عضو باشگاه پژوهشگران جوان، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد فلاورجان Rahele Namazi راحله نمازی 10031947532846003257 10031947532846003257 No BSc, Department of Medical Genetics, Faculty of Medicine, Isfahan University of Medical Sciences, Isfahan, Iran کارشناس، گروه ژنتیک پزشکی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی اصفهان Mohamad Reza Aghasadeghi محمدرضا آقاصادقی 10031947532846003258 10031947532846003258 No Assistant Professor, Department of Hepatitis and AIDS, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran گروه هپاتیت و ایدز، انستیتو پاستور تهران Mansoor Salehi منصور صالحی 10031947532846003259 10031947532846003259 No Associate Professor, Department of Medical Genetics, Faculty of Medicine, Isfahan University of Medical Sciences, Isfahan, Iran گروه ژنتیک پزشکی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی اصفهان Seyed Davar Siadat سید داور سیادت 10031947532846003260 10031947532846003260 No Assistant Professor, Department of Parasitology, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran گروه هپاتیت و ایدز، انستیتو پاستور تهران Saied Reza nadaf سعید رضا نداف 10031947532846003261 10031947532846003261 No گروه انگل شناسی، انستیتو پاستور تهران