fa همسانه‌سازی، بیان و تخلیص انتهای کربوکسیل زیرواحد C آنزیم اوره‌آز هلیکوباکتر پیلوری به منظور تولیدIgY در زرده تخم مرغ گوارش Gastrology تجربي Experimental <div style="text-align: justify direction: rtl"> <span style="font-weight: bold">سابقه و هدف:</span> هلیکوباکتر پیلوری (H.pylori) نوعی باکتری گرم منفی اسپیرال و میکروآیروفیل است که در لایه مخاطی معده انسان تکثیر و ایجاد عفونت می نماید. رویکردهای جدید در جهت بکارگیری درمان های اختصاصی نظیر ایمنوتراپی برای ریشه کنی این عفونت میباشند. آنزیم اوره آز یکی از مهمترین عوامل بیماری زا و آنتی ژنیک این باکتری است.<br><span style="font-weight: bold"> روش بررسی:</span> دراین مطالعه تجربی، ابتدا بخش انتهای کربوکسیل زیر واحد C اوره آز، پس از تخلیص ژنوم باکتری، با کمک واکنش زنجیره پلیمراز (PCR) تکثیر شده و محصول روی ناقل بیانی pET28a کلون شد. پروتئین نوترکیب پس از تراریخت سازه نوترکیب به باکتری E.coli سوش Bl21DE3 بیان شد و نتایج با استفاده از SDS-PAGE تحلیل و پروتئین نوترکیب از طریق کروماتوگرافی میل ترکیبی با کمک ستون Ni-NTA تخلیص شد. پروتئین نوترکیب تخلیص شده، به مرغ لگهورن سفید تزریق و IgY با روش استون/کلروفرم تخلیص و با روش ELISA و SDS-PAGE مورد ارزیابی قرار گرفت.<br><span style="font-weight: bold"> یافته ها:</span> با تعیین توالی سازه نوترکیب، صحت انجام همسانه سازی تأیید شد. بررسی با SDS-PAGE نشان داد پروتئین نوترکیب rUreCc به خوبی بیان و تخلیص شده است. همچنین نتایج الایزا ایمن‌زایی بالای این پروتئین نوترکیب را نشان داد. نتیجه‌گیری: تولید پروتئین نوترکیب rUreCc هلیکوباکتر پیلوری در E.coli به عنوان سلول میزبان، امکان دسترسی آسان به آنتی-ژن را فراهم کرد. علیرغم کوچک بودن آنتی‌ژن نوترکیب، توانایی ایمنی زایی آن شبیه به کل زیر واحد C اوره آز است </div> <span style="font-weight: bold">Background:</span> H. pylori is a spiral, microaerophilic gram negative bacterium, that multiplies and causes infection in human gastric mucosal layer. New approaches have focused on using specific treatments, such as immunotherapy, to eradicate this infection. Urease, as one of the most important virulent and antigenic factors of the bacterium, is a suitable target for this purpose.<br><span style="font-weight: bold"> Material and methods</span>: In this experimental study, after purification of bacterial genomic, 3’ segment of ureC gene was amplified by polymerase chain reaction (PCR). The PCR product was ligated to pET28a. The recombinant protein was expressed followed by transformation of recombinant construct into E. coli BL21DE3. SDS-PAGE analysis was carried out and the recombinant protein was purified by Ni-NTA affinity chromatography. The purified recombinant protein was injected to hens. IgY recovered from egg yolk, was purified by aceton/chloroform precipitation. The purified IgY was analyzed by ELISA and SDS-PAGE. <br> <span style="font-weight: bold">Results:</span> Sequencing of recombinant construct confirmed accuracy of cloning. SDS-PAGE analysis revealed a good expression and purification of the recombinant protein rUreCc. ELISA observation demonstrated high immunogenicity of the recombinant protein. <span style="font-weight: bold">Conclusion:</span> Production of rUreCc recombinant protein of H. pylori within E.coli, as host cell, provides an easy availability to antigen. In spite of recombinant antigen small size, its immunization potency is similar to total subunit of urease. Also, small size of recombinant protein has an important role in its stability, expression and purification. هلیکوباکتر پیلوری، اوره‌آز، زیر واحد UreC، IgY Helicobacter pylori, Urease, UreC, IgY technology 23 31 http://tmuj.iautmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-155-33&slc_lang=fa&sid=1 Hossein Basiri حسین بصیری hosseinbasiri@yahoo.com 10031947532846003321 10031947532846003321 Yes Islamic Azad University, Science and Research Campus, Tehran, Iran دانشگاه آزاداسلامی واحد علوم و تحقیقات Seyed Latif Mousavi Gargari سیدلطیف موسوی گرگری 10031947532846003322 10031947532846003322 No Shahed University, Tehran, Iran دانشگاه شاهد Iraj Rasuli ایرج رسولی 10031947532846003323 10031947532846003323 No Shahed University, Tehran, Iran دانشگاه شاهد kazem parivar کاظم پریور 10031947532846003324 10031947532846003324 No Islamic Azad University, Science and Research Campus, Tehran, Iran دانشگاه آزاداسلامی واحد علوم و تحقیقات Taher Nejad Satari طاهر نژادستاری 10031947532846003325 10031947532846003325 No Islamic Azad University, Science and Research Campus, Tehran, Iran دانشگاه آزاداسلامی واحد علوم وتحقیقات