fa کلونینگ و بیان پروتئین فاکتور رشد جفتی-1 انسانی (hPLGF-1) در سیستم بیانی Rosetta E.coli ژنتيك Genetic تجربي Experimental <div style="text-align: justify direction: rtl"> <span style="font-weight: bold">سابقه و هدف: </span>آنژیوژنزیس یا شکل گیری عروق خونی جدید در شرایط فیزیولوژیک و پاتولوژیک مهم ترین عامل رشد و تکثیر سلول ها است. پروتئین PLGFیا فاکتور رشد جفتی یکی از مهم ترین پروتئین ها در تحریک آنژیوژنزیس است. در این پژوهش، ژن PLGF-1 انسانی از بافت جفت جدا شده و پروتئین مورد نظر در سیستم باکتریایی بیان شد. <br><span style="font-weight: bold">روش بررسی:</span> دراین مطالعه تجربی، ناحیه کد کننده ژن PLGF-1 از بافت جفت انسان توسط پرایمرهای اختصاصی تکثیر شد. قطعه ژنی مورد نظر در پلاسمیدهای pET28a و pET32a کلون شد. پلاسمیدهای نوترکیب pET28a-PLGF-1 و pET32a-PLGF-1 به باکتری E.coli Rosetta منتقل شدند و بیان پروتئین نوترکیب توسطIPTG القاء گردید. بیان پروتئین نوترکیب و محلولیت آن با SDS-PAGE بررسی و با روش وسترن بلاتینگ هویت آن تائید شد. <br><span style="font-weight: bold">یافته ها: </span>مراحل طراحی و ساخت سازه ژنی pET28a-PLGF-1 و pET32a-PLGF-1 با موفقیت انجام و توالی ژن PLGF-1 تأیید گردید. باکتریهای القاء شده با IPTG پروتئین PLGF-1 را بیان کردند و توسط وسترن بلاتینگ به تایید رسید. همچنین پروتئین نوترکیب PLGF-1 تقریبا به صورت نامحلول بیان شد.<br><span style="font-weight: bold"> نتیجه گیری: </span>پروتئین PLGF-1 به خوبی در سیستم بیانی RosettaE.coliبیان می‌شود و می‌توان از این پروتئین نوترکیب در تست-های مختلف استفاده نمود. </div> <span style="font-weight: bold">Background:</span> Angiogenesis or new blood vessels generation is the most important factor affecting cell growth and proliferation in physiologic and pathologic conditions. Placenta Growth Factor (PLGF) is one of the important proteins for angiogenesis induction. In this study, placenta-derived PLGF-1 cDNA was cloned and expressed in Escherichia coli expression system. <br><span style="font-weight: bold">Materials and methods:</span> In this experimental study, the human placenta-derived PLGF-1 gene was amplified using specific primers and was cloned into pET32a and pET28a expression vectors. In order to express target protein, pET32a-PLGF-1 and pET28a-PLGF-1 constructs were transformed into E.coli Rosetta. PLGF-1 expression was induced by IPTG, and then the yield of expressed protein and its solubility was analyzed by SDS-PAGE and Western blotting assay. <br> <span style="font-weight: bold">Results:</span> The pET32a-PLGF-1 and pET28a-PLGF-1 constructs were confirmed by sequencing. The bacterial lysates derived from IPTG-induced samples showed exact proteinand confirmed by western bloting. The majority of the expressed protein was insoluble. <span style="font-weight: bold">Conclusion</span>: The PLGF-1 is well expressed in Rosetta E.coli system and it could be used in different project. آنژیوژنزیس، کلونینگ و بیان، فاکتور رشد جفتی -1انسان Angiogenesis, Cloning, Gene expression, PLGF-1 32 38 http://tmuj.iautmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-155-37&slc_lang=fa&sid=1 Narges arbabi نرگس اربابی 10031947532846003332 10031947532846003332 No Islamic Azad University, Science and Research Campus, Tehran, Iran دانشگاه آزاد اسلامی، واحد علوم و تحقیقات تهران mehdi Behdani مهدی بهدانی 10031947532846003333 10031947532846003333 No , Biotechnology Research Center, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی، انستیتو پاستور ایران majid golkar مجید گل کار 10031947532846003334 10031947532846003334 No , Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran انستیتو پاستور ایران Seyed Hamid Aghaee bakhtiari سیدحمید آقایی بختیاری 10031947532846003335 10031947532846003335 No , Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی، انستیتو پاستور ایران Hossein Khan ahmad shahreza حسین خان احمدشهرضا 10031947532846003336 10031947532846003336 No Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran انستیتو پاستورایران Reza Mahdian رضا مهدیان rezamahdian@yahoo.com 10031947532846003337 10031947532846003337 Yes Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی، انستیتو پاستور ایران