fa همسانه سازی ژن virG و ساخت سازه جهش یافته pGEM∆virG به منظور القای نوترکیبی در سویه شیگلا دیسانتری بومی زيست شناسي مولكولي Molecular Biology تجربي Experimental <b>سابقه و هدف: </b>بیماری شیگلوز از علل عمده ابتلا کودکان به اسهال در ایران است و ژن virG نقش کلیدی را در بیماری‌زایی و قدرت تهاجم باکتری شیگلا بازی می‌کند. هدف از این مطالعه، همسانه سازی، توالی یابی ژن virG و ساخت سازه جهش یافته pGEM∆virG به منظور القای نوترکیبی در سویه شیگلا بومی با هدف ساخت سویه کاندید واکسنی زنده تقلیل حدت یافته است. <br><b>روش بررسی:</b> با استفاده از آزمون‌های بیوشیمیایی، سویه شیگلای بومی بررسی و ژن virG در حامل pGEM-7zf همسانه‌سازی و سپس توالی نوکلئوتیدی آن تعیین گردید. بر اساس اطلاعات حاصل از توالی یابی، نقشه برش آنزیمی حامل نوترکیب pGEMvirG استخراج و نسبت به حذف نواحی از ژن virG با استفاده از واکنش هضم آنزیمی اقدام شد. در نهایت، سازه pGEM∆virG با به کار گیری روش شیمیایی به باکتری اشرشیاکلی تراریخت سازی گردید. <br><b>یافته‌ها: </b>سویه شیگلای بومی تایید گردید. توالی‌یابی ژن virG در پایگاه داده‌های ژنومیNCBI) ) ثبت گردید. سازه pGEM∆virG یک ساختار جهش یافته از ژن virG در باکتری اشریشیاکلی را شامل می‌شود که 1751 جفت باز از آن، از طریق واکنش هضم آنزیمی حذف شده است. <br><b>نتیجه‌گیری:</b> استفاده از تکنیک تبادل آللی بر پایه بهره گیری از رخداد نوترکیبی در باکتری ها یکی از موثرترین روش های ایجاد گسستگی در ژن های هدف می باشد. این ساختار جهش یافته می تواند به منظور ایجاد سویه کاندید واکسنی زنده تقلیل حدت یافته شیگلا دیسانتری مورد استفاده قرار گیرد. <b>Background:</b> Shigellosis disease is the major causes of morbidity in children with diarrhea in Iran. The virG (icsA) gene plays a key role in pathogenesis and ability of invasion in shigella. The aim of this study was cloning, sequencing virG gene and developing a mutant construct pGEM∆virG in order to induction recombination in a native shigella for generation a live attenuated vaccine candidate strain. <br><b>Materials and methods:</b> Initially, by use of biochemical tests, the native shigella strain was detected. The virG gene was cloned in pGEM-7zf vector and the nucleotide sequence was determined. According to the data of sequencing, digestion mapping of pGEMvirG vactor was obtained and a part of virG gene by using enzymatic digestion was removed. Finally, pGEM∆virG construct was transformed to E. coli by utilization of chemical transformation method. <br><b>Results:</b> The native shigella strain by using biochemical tests was confirmed. The result of sequencing virG gene (native strain) was submitted in NCBI Genebank database. The pGEM∆virG construct contains a mutant construct of virG gene which 1751 bp was deleted through enzymatic digestion reaction and transformed in E. coli. <br> <b>Conclusion:</b> Using the technique of allelic exchange based on the incident of recombination in bacteria is one of the most effective methods to develop a disruption in the target genes. This mutant construct can be applied in development of a live attenuated Shigella dysenteriae vaccine candidate. تبادل آللی ، شیگلا دیسانتری، ژنvirG ، کاندید واکسنی زنده تقلیل حدت یافته Allelic exchange, Shigella dysenteriae, virG gene, Live attenuated vaccine candidate 184 190 http://tmuj.iautmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-155-58&slc_lang=fa&sid=1 Hora Ahmadi Danesh حورا احمدی دانش 10031947532846003567 10031947532846003567 No MSc Student of Cellular and Molecular Biology, Department of Cell Biology, Faculty of Science, Imam Hossein University, Tehran, Iran دانشجوی کارشناسی ارشد زیست شناسی سلولی و مولکولی، گروه زیست شناسی سلولی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین (ع) Mojtaba Saadati مجتبی سعادتی m_saadati@yahoo.com 10031947532846003568 10031947532846003568 Yes PhD of Bacteriology, Department of Cell Biology, Faculty of Science, Imam Hossein University, Tehran, Iran دکترای باکتری شناسی، گروه زیست شناسی سلولی، دانشکده علوم، دانشگاه امام حسین (ع) Mohammad Doroudian محمد درودیان 10031947532846003569 10031947532846003569 No MSc Student of Cellular and Molecular Biology, Islamic Azad University, Central Tehran Branch, Young Reserchers Club, Tehran, Iran دانشجوی کارشناسی ارشد زیست شناسی سلولی و مولکولی، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد تهران مرکز، باشگاه پژوهشگران جوان Bagher Yakhchali باقر یخچالی 10031947532846003570 10031947532846003570 No PhD of Microbiology, Department of Industrial and Environmental Biotechnology, National Institute of Genetics and Biotechnology, Tehran, Iran دکترای میکروبیولوژی، گروه صنعت و محیط زیست، پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری Ali Asghar Karkhaneh علی اصغر کارخانه 10031947532846003571 10031947532846003571 No PhD of Molecular Genetics, Department of Industrial and Environmental Biotechnology, National Institute of Genetics and Biotechnology, Tehran, Iran دکترای ژنتیک مولکولی، گروه صنعت و محیط زیست، پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری Sayed Mostafa Hosseini سیدمصطفی حسینی 10031947532846003572 10031947532846003572 No Young Researchers Club, Islamic Azad University, Science and Research Campus, Tehran, Iran باشگاه پژوهشگران جوان، دانشگاه آزاد اسلامی، ، واحد علوم تحقیقات Mokhdar Zare مختار زارع 10031947532846003573 10031947532846003573 No Researcher, Department of Cell Biology, Faculty of Science, Imam Hossein University, Tehran, Iran پژوهشگر، گروه زیست شناسی سلولی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین (ع) Mehrdad Hashemi مهرداد هاشمی 10031947532846003574 10031947532846003574 No PhD of Molecular Genetics, Islamic Azad University, Tehran Medical Branch, Tehran, Iran دکترای ژنتیک مولکولی، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد پزشکی تهران