Medical Sciences Journal of Islamic Azad University

fa مقایسه کمی حساسیت NASBA-ELISA و RT-PCR-ELISA در اندازه گیری رونویس الحاقی ژن های BCR-ABL بیماران مبتلا به CML Quantitative comparison of NASBA-ELISA and RT-PCR-ELISA sensitivities for measurement of the BCR-ABL genes fusion transcript in CML patients اپيدميولوژي Epidemiology سابقه و هدف: بیماران مبتلا به لوسمی میلوئیدی مزمن (CML) دارای کرموزوم فیلادلفیا هستند. این کروموزوم حاصل جابجایی بازوهای بلند کروموزوم های 9 و 22 (q34q11) بوده که منجر به ایجاد الحاق بین ژنهای BCR و ABL می گردد. در این مطالعه، تکنیک های RT-PCR و NASBA در تعیین رونویس های bcr-abl مقایسه شد. روش بررسی: رونویس های الحاقی بطور مصنوعی سنتز و RNA از رده سلولی لوسمیک K562 استخراج گردید. سریال رقت هم از رونویس های الحاقی سنتز شده و هم RNA استخراج شده تهیه شد و سپس حساسیت هر دو تکنیک تعیین گردید. محصولات واکنش RT-PCR و NASBAبا نسبت برابری به ترتیب با DIG-11-dUTP و DIG-11-UTP نشاندار شد. بدنبال دناتوراسیون، واکنش هیبریداسیون با پروب اختصاصی روی هر دو محصول انجام شد. محصولات در میکروپلیت های پوشیده شده با استرپتواویدین انکوبه شد. پس از شستشو پلیت ها، آنتی دیگ کونژوگه با پراکسیداز اضافه و با استفاده از سوبسترا ATBS فعالیت آنزیمی در طول موج 405 نانومتر تعیین شد. یافته ها: اختصاصیت هر دو روش یکسان بود، اما حساسیت 100RT-PCR-ELISA برابر بیشتر از روش NASBA-ELISA بود. به عبارتی RT-PCR-ELISA توانست 100 پیگوگرم RNA کمتری را نسبت به 0/006) NASBA-ELISA در مقابل 06/0 پیکوگرم RNA) را شناسایی نماید. هم چنین میزان شناسایی سلول های لوسمیک توسط این دو روش به ترتیب 4 و 400 سلول بود. نتیجه گیری: با وجودی که NASBA به ترمال سیکلر نیازی ندارد، اما حساسیت آن کمتر از روش RT-PCR بوده و نمی تواند روش مناسبی برای ارزیابی کمی باشد. Background: Chronic myeloid leukemia (CML) is characterized by neoplastic overproduction of myelocytes and neutrophils. Affected patients have a Philadelphia chromosome which arises following a translocation between long arms of chromosome 9 and 22 (q34q11). This results in abelson murine/breakpoint cluster region (BCR/ABL) fusion. Detection of cells carrying BCR/ABL fusion is extremely important in monitoring response to treatment, remission and relapse in CML patients. In this study, we compared RT-PCR and NASBA techniques to determine quantitatively the number of bcr/abl transcripts. Materials and Methods: Fusion transcripts were synthesized and RNA was extracted from K562 leukemic cell line. A serial dilution of both fusion transcript and RNA was prepared then sensitivities of both techniques were determined. RT-PCR and NASBA reaction products were labeled using equal ratios of DIG-11-dUTP and DIG-11-UTP respectively. Following denaturation, hybridization reactions were carried out with specific probes. The products were incubated in streptavidin coated microplates. Then, the plates were washed, anti-DIG conjugated with peroxidase added and using ATBS as substrate, enzymatic activity was determined by absorption at 405 nm. Results: The results showed that specificity of two techniques was equal but RT-PCR-ELISA sensitivity was about 100-fold more than NASBA-ELISA as it could detect 100 pg RNA less than NASBA-ELISA (0.006 versus 0.06 pg RNA). Furthermore, leukemia cell detection precision by RT-PCR-ELISA and NASBA-ELISA was 4 and 400 cells, respectively. Conclusion: While NASBA technique does not need thermal cycler PCR but has less sensitivity than RT-PCR and is not suitable for quantitative assessment. RT،PCR،ELISA ،NASBA،ELISA، رونویس های bcr،abl RT-PCR-ELISA, NASBA-ELISA, BCR/ABL transcript 67 74 http://tmuj.iautmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-137&slc_lang=fa&sid=1 Ali Nazemi علی ناظمی Alinazemy@yahoo.com 10031947532846001634 10031947532846001634 Yes Majid Sadeghizadeh مجید صادقی زاده 10031947532846001635 10031947532846001635 No Mehdi Forouzandeh Moghaddam مهدی فروزنده مقدم 10031947532846001636 10031947532846001636 No Gholamreza Javadi غلامرضا جوادی 10031947532846001637 10031947532846001637 No Mehrdad Hashemi مهرداد هاشمی 10031947532846001638 10031947532846001638 No 10031947532846001639 10031947532846001639 No