|
بررسی و مقایسه روشهای مبتنی بر رسوب دهی و کروماتوگرافی تمایلی در تخلیص پروتئین نوترکیب استرپتوکیناز
|
مسعود سیدین خراسانی1    ، ملیحه کرامتی2 ، رضا آهنگری کهن3 ، فرزین روحوند4 ، داریوش نوروزیان 5 |
1- دانشجوی دکتری تخصصی بیوتکنولوژی دارویی، انستیتو پاستور ایران، بخش نانوبیوتکنولوژی، تهران، ایران
2- استادیار، دکتری تخصصی بیوتکنولوژی دارویی، انستیتو پاستور ایران، بخش نانوبیوتکنولوژی، تهران، ایران
3- دانشیار، دکتری تخصصی بیوتکنولوژی دارویی، انستیتو پاستور ایران، بخش نانوبیوتکنولوژی، تهران، ایران
4- دانشیار، دکتری تخصصی بیوتکنولوژی پزشکی، انستیتو پاستور ایران، بخش ویروس شناسی، تهران، ایران
5- استاد، دکتری تخصصی بیوشیمی، انستیتو پاستور ایران، بخش نانوبیوتکنولوژی، تهران، ایران ، dnsa@pasteur.ac.ir |
|
|
چکیده: (2811 مشاهده) |
سابقه و هدف: تخلیص پروتئین با بازده و خلوص بالا چالشی جدی در تهیه پروتئین های نوترکیب دارویی است. از بین استراتژیهای تخلیص پروتئین هدف، روشهای تخلیص بر پایه کروماتوگرافی تمایلی مانند Ni-NTA بسیار پرکاربرد و در عین حال هزینهبر هستند. روشهای تخلیص مستقل از ستون، مانند استفاده از پروتئین های شبیه به الاستین (ELP)، به عنوان روشهای جایگزین در حال توسعه هستند. در این تحقیق، کارایی استفاده از رزین نیکل، ELP و ترکیب آنها (ELP/Ni-NTA) در تخلیص پروتئین استرپتوکیناز مورد ارزیابی قرار گرفت.
روش بررسی: ژن استرپتوکیناز توسط PCR تکثیر، در پلازمیدpET21 کلون و به سلولE.coli-Rosetta ترانسفرم شد. پروتئین آن بیان و تخلیص شد سپس ماهیت و خلوص پروتئین به ترتیب توسط وسترن بلات و SDS-PAGE مورد ارزیابی قرار گرفت. بازده خالص سازی در هریک از روش های تخلیص با میکروبرادفورد محاسبه شد.
یافتهها: بازده خالص سازی ELP-SK-His با استفاده از ستون Ni-NTA به مقدار µg/ml 14±108 و ELP به مقدار µg/ml 16±76و ELP/Ni-NTA به مقدار µg/ml 11±88 محاسبه شد. نتایج رنگ آمیزی و وسترن بلات نشان داد که کیفیت خلوص پروتئین خالص شده با ELP/Ni-NTA بیشر از روش ELP و Ni-NTA به تنهایی بود.
نتیجهگیری: مطالعه حاضر نشان داد که ادغام روشهای خالص سازی در یک مرحله میتواند باعث افزایش خلوص و بازده محصول نهایی در تولید پروتئینهای نوترکیب دارویی شود. |
|
| واژه‌های کلیدی: پلی پپتیدهای شبیه الاستین، تخلیص پروتئین، استرپتوکیناز، تخلیص مستقل از ستون |
|
|
متن کامل [PDF 462 kb]
(4053 دریافت)
|
نيمه آزمايشي : تجربي |
موضوع مقاله:
بيوتكنولوژي
دریافت: 1398/6/10 | پذیرش: 1398/11/7 | انتشار: 1399/9/30
|
|
|
|
|
|
|
| ارسال پیام به نویسنده مسئول |
|
|
|
| ارسال نظر درباره این مقاله |
|
|
|
