1- دانشگاه آزاد اسلامی، واحد علوم و تحقیقات تهران 2- گروه ژنتیک مولکولی دانشگاه آزاد اسلامی، واحد پزشکی تهران 3- انستیتو پاستور ایران ، azimakbarzadeh@pasteur.ac.ir 4- انستیتو پاستور ایران 5- انستیتو پاستور ایران، تهران 6- دانشگاه آزاد اسلامی، واحد جهرم
چکیده: (26146 مشاهده)
سابقه و هدف: L لیزین یکی از اسیدهای آمینه ضروری است که به دلیل کاربرد بسیار در صنایع مختلف، در سال های اخیر تقاضا برای این اسید آمینه افزایش یافته و این منجر به گسترش تحقیقات برای تولید صنعتی این اسیدآمینه شده است.
روش بررسی: در این پژوهش با بهینه سازی ژنتیکی سعی در افزایش بازده تولید این اسیدآمینه شد. پس از بررسی آنزیم های تاثیرگذار در مسیر بیوسنتز لیزین، ژن ddh کدکننده آنزیم دی آمینوپیملات دهیدروژناز انتخاب شد. پس از استخراج DNA کروموزومی سویه Corynebacterium glutamicum ATCC 21799 و طراحی پرایمر، قطعه ژنی جدا شده و به منظور تسهیل همسانه-سازی و تعیین ترادف نوکلئوتیدی در وکتور TAcloning کلون گردید. هضم آنزیمی دو وکتور TAcloning و pET28a توسط آنزیم های برشی SalI و EcoRI انجام و پس از تیمار وکتور با آلکالین فسفاتاز، واکنش لیگاسیون صورت گرفت. سپس در سوش E.coliDH5α و در نهایت در میزبان بیانی E.coliBL21(DE3) ترانسفورم شد.
یافته ها: مشاهده باند bp1150 در نمونه های PCR و محصول پلاسمید تخلیص شده و هضم شده با دو آنزیم مذکور و همچنین نتیجه تعیین توالی نشان داد که ژن مورد نظر به درستی کلون گردیده است. بررسی میزان بیان پروتئین نوترکیب توسط ژل SDS-Page تاییدی دیگر بر صحت کلون سازی و فعالیت پروموتور می باشد.
نتیجه گیری: در این تحقیق برای اولین بار میزان بیان آنزیم دی آمینوپیملات دهیدروژناز در این وکتور بیانی افزایش قابل قبولی را نشان داد.
Ghassemi S, Hashemi M, Akbarzadeh A, Mehrabi S M R, Farhangi A, Cheraghi S, et al . Cloning of the Corynebacterium glutamicum ddh gene in order to increasing the lysine production. MEDICAL SCIENCES 2011; 21 (2) :82-88 URL: http://tmuj.iautmu.ac.ir/article-1-447-fa.html
قاسمی سهیل، هاشمی مهرداد، اکبرزاده عظیم، مهرابی سیدمحمدرضا، فرهنگی علی، چراغی صغری، و همکاران.. همسانه سازی ژن ddh از Corynebacterium glutamicum در راستای افزایش تولید اسیدآمینه لیزین. فصلنامه علوم پزشکی دانشگاه آزاد اسلامی تهران. 1390; 21 (2) :82-88
