[صفحه اصلی ]   [Archive] [ English ]  
:: صفحه اصلي :: درباره نشريه :: آخرين شماره :: تمام شماره‌ها :: جستجو :: ثبت نام :: ارسال مقاله :: تماس با ما ::
:: دوره 31، شماره 1 - ( بهار1400 1400 ) ::
جلد 31 شماره 1 صفحات 70-78 برگشت به فهرست نسخه ها
دستکاری ژنتیکی سلولهای بنیادی مزانشیمی انسانی مشتق از چربی با miR-34a
کتایون بهمن صوفیانی1 ، علی اکبر پورفتح اله 2، مهین نیکو گفتار ظریف3، احسان عارفیان4
1- دانشجوی دکتری دانشگاه تربیت مدرس، گروه ایمنی شناسی پزشکی، دانشکده علوم پزشکی دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران
2- استاد دانشگاه تربیت مدرس، گروه ایمنی شناسی پزشکی، دانشکده علوم پزشکی دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران ، pourfa@modares.ac.ir
3- دانشیار سازمان انتقال خون ایران، گروه هماتولوری، موسسه آموزش عالی سازمان انتقال خون ایران، تهران، ایران
4- استادیار دانشگاه تهران، گروه میکروبشناسی، پردیس علوم پایه، دانشکده زیست شناسی، دانشگاه تهران، تهران، ایران
چکیده:   (690 مشاهده)
سابقه و هدف: ژن تراپی ایمن و موثر به عنوان یکی از اهداف درمانی در بسیاری از بیماری­ها در نظر گرفته می­شود. با توجه به نقش مهم سلول­های بنیادی در سل تراپی، این مطالعه با هدف تولید سلول­های بنیادی مزانشیمی مشتق از چربی انسان (hASC) با افزایش بیان miR-34a انجام شد.
روش بررسی: توالی پیش ساز hsa-mir-34a  در وکتورPCDH  لنتی ویروس کلون شد. وکتور نوترکیب و دو وکتور کمکی یعنی psPAX و pMD2  با روش کلسیم فسفات به داخل HEK-293T  منتقل شدند. سوپ ویروسی جمع آوری و با اولترا سانتریفیوژ  تغلیظ شد. سلول­هایHEK-293T ترانسدیوس شده در روز چهارم با فلوسایتومتری ارزیابی شدند. پس از تعیین غلظت ویروسی، سلول­های hASC با ویروس­های تغلیظ شده ترانسدیوس شدند. استخراج RNA و سنتز cDNA به منظور ارزیابی میزان بیان miR-34a با Real Time PCR انجام شد.   
یافته ­ها: توالی پیش ساز hsa-mir-34a   کلون شده در وکتور PCDH با colony-PCR و DNA sequencing تائید شد. ترانسداکشن سلول­های HEK-293T و hASC  در زیر میکروسکوپ معکوس فلورسنت دار و فلوسایتومتری مورد تائید قرار گرفتند. ارزیابی میزان بیان miR-34a در سلول­های آلوده به ویروس نوترکیب نشان داد که نسبت بیان miR-34a در گروه تست به طور معنی­داری بیشتر از گروه کنترل بود (001/0=P).
نتیجه­ گیری: این مطالعه نشان دادکه از سیستم­های لنتی­ویروس­ها می­توان برای وارد کردن ژن­های خارجی نظیر miR-34a  به سلول­ها استفاده کرد. همچنین این مطالعه نشان داد که سلول­های بنیادی دستکاری شده ژنتیکی به عنوان delivery system برای انتقال miR-34a و یا هر ژن دیگری می­توانند استفاده شوند.
واژه‌های کلیدی: سلولهای بنیادی، لنتی ویروس، ترنسداکشن، ترنسفکشن، HEK-293T، miR-34a
متن کامل [PDF 633 kb]   (306 دریافت)    
نيمه آزمايشي : بنيادي | موضوع مقاله: زيست شناسي مولكولي
دریافت: 1399/2/22 | پذیرش: 1399/6/15 | انتشار: 1400/1/4
فهرست منابع
1. Friedenstein A, Chailakhjan R, Lalykina K. The development of fibroblast colonies in monolayer cultures of guinea-pig bone marrow and spleen cells. Cell Prolif 1970;3:393-403. [DOI:10.1111/j.1365-2184.1970.tb00347.x]
2. Dominici M, Le Blanc K, Mueller I, Slaper-Cortenbach I, Marini F, Krause D, et al. Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells. The International Society for Cellular Therapy position statement. Cytotherapy 2006;8:315-7. [DOI:10.1080/14653240600855905]
3. Phinney DG, Prockop DJ. Concise review: mesenchymal stem/multipotent stromal cells: the state of transdifferentiation and modes of tissue repair-current views. Stem Cells 2007;25:2896-902. [DOI:10.1634/stemcells.2007-0637]
4. Loebinger MR, Kyrtatos PG, Turmaine M, Price AN, Pankhurst Q, Lythgoe MF, et al. Magnetic resonance imaging of mesenchymal stem cells homing to pulmonary metastases using biocompatible magnetic nanoparticles. Cancer Res 2009;69:8862-7. [DOI:10.1158/0008-5472.CAN-09-1912]
5. Sasportas LS, Kasmieh R, Wakimoto H, Hingtgen S, Van De Water JA, Mohapatra G, et al. Assessment of therapeutic efficacy and fate of engineered human mesenchymal stem cells for cancer therapy. Proc Natl Acad Sci U.S.A 2009;106:4822-7 . [DOI:10.1073/pnas.0806647106]
6. Patel SA, Meyer JR, Greco SJ, Corcoran KE, Bryan M, Rameshwar P. Mesenchymal stem cells protect breast cancer cells through regulatory T cells: role of mesenchymal stem cell-derived TGF-β. J Immunol 2010;184:5885-94. [DOI:10.4049/jimmunol.0903143]
7. Menon LG, Picinich S, Koneru R, Gao H, Lin SY, Koneru M, et al. Differential gene expression associated with migration of mesenchymal stem cells to conditioned medium from tumor cells or bone marrow cells. Stem Cells 2007;25:520-8. [DOI:10.1634/stemcells.2006-0257]
8. Kidd S, Spaeth E, Dembinski JL, Dietrich M, Watson K, Klopp A, et al. Direct evidence of mesenchymal stem cell tropism for tumor and wounding microenvironments using in vivo bioluminescent imaging. Stem Cells 2009;27:2614-23. [DOI:10.1002/stem.187]
9. Beckermann B, Kallifatidis G, Groth A, Frommhold D, Apel A, Mattern J, et al. VEGF expression by mesenchymal stem cells contributes to angiogenesis in pancreatic carcinoma. Br J Cancer 2008;99:622-31. [DOI:10.1038/sj.bjc.6604508]
10. Block GJ, Ohkouchi S, Fung F, Frenkel J, Gregory C, Pochampally R, et al. Multipotent stromal cells are activated to reduce apoptosis in part by upregulation and secretion of stanniocalcin-1. Stem Cells 2009;27:670-81. [DOI:10.1002/stem.20080742]
11. Barcellos-de-Souza P, Gori V, Bambi F, Chiarugi P. Tumor microenvironment: Bone marrow-mesenchymal stem cells as key players. Biochim Biophys Acta 2013;1836:321-35. [DOI:10.1016/j.bbcan.2013.10.004]
12. Waterman RS, Tomchuck SL, Henkle SL, Betancourt AM. A new mesenchymal stem cell (MSC) paradigm: polarization into a pro-inflammatory MSC1 or an Immunosuppressive MSC2 phenotype. PloS One 2010;5:10088. [DOI:10.1371/journal.pone.0010088]
13. Rüegger S, Großhans H. MicroRNA turnover: when, how, and why. Trends Biochem Sci 2012;37:436-46. [DOI:10.1016/j.tibs.2012.07.002]
14. Xu L, Yang Bf, Ai J. MicroRNA transport: a new way in cell communication. J Cell Physiol 2013;228:1713-9. [DOI:10.1002/jcp.24344]
15. Reddy KB. MicroRNA (miRNA) in cancer. Cancer Cell Int 2015;15:38. [DOI:10.1186/s12935-015-0185-1]
16. Collino F, Bruno S, Deregibus MC, Tetta C, Camussi G. MicroRNAs and mesenchymal stem cells. Vitam Horm. 2011;87:291-320. [DOI:10.1016/B978-0-12-386015-6.00033-0]
17. Chen Y, Gao D-Y, Huang L. In vivo delivery of miRNAs for cancer therapy: challenges and strategies. Adv Drug Deliv Rev 2015;81:128-41. [DOI:10.1016/j.addr.2014.05.009]
18. Calin GA, Croce CM. MicroRNA signatures in human cancers. Nat Rev Cancer 2006;6:857-66. [DOI:10.1038/nrc1997]
19. Gao J, Li N, Dong Y, Li S, Xu L, Li X, et al. miR-34a-5p suppresses colorectal cancer metastasis and predicts recurrence in patients with stage II/III colorectal cancer. Oncogene 2015;34:4142-52. [DOI:10.1038/onc.2014.348]
20. Tomás HA, Rodrigues AF, Alves PM, Coroadinha AS. Lentiviral Gene Therapy Vectors: Challenges and Future Directions. London: InTechOpen; 2013.
21. Escors D, Breckpot K. Lentiviral vectors in gene therapy: their current status and future potential. Arch Immunol Ther Exp 2010;58:107-19. [DOI:10.1007/s00005-010-0063-4]
ارسال پیام به نویسنده مسئول

ارسال نظر درباره این مقاله
نام کاربری یا پست الکترونیک شما:

CAPTCHA



XML   English Abstract   Print


Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:

Bahman Soufiani K, Pourfathollah A A, Nikougoftar Zarif M, Arefian E. Gene manipulation of human adipose-derived mesenchymal stem cells by miR-34a. MEDICAL SCIENCES. 2021; 31 (1) :70-78
URL: http://tmuj.iautmu.ac.ir/article-1-1726-fa.html

بهمن صوفیانی کتایون، پورفتح اله علی اکبر، نیکو گفتار ظریف مهین، عارفیان احسان. دستکاری ژنتیکی سلولهای بنیادی مزانشیمی انسانی مشتق از چربی با miR-34a. فصلنامه علوم پزشکی. 1400; 31 (1) :70-78

URL: http://tmuj.iautmu.ac.ir/article-1-1726-fa.html



بازنشر اطلاعات
Creative Commons License این مقاله تحت شرایط Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License قابل بازنشر است.
دوره 31، شماره 1 - ( بهار1400 1400 ) برگشت به فهرست نسخه ها
فصلنامه علوم پزشکی دانشگاه آزاد اسلامی واحد پزشکی تهران Medical Science Journal of Islamic Azad Univesity - Tehran Medical Branch
Persian site map - English site map - Created in 0.05 seconds with 29 queries by YEKTAWEB 4331